Микробиология. Начало

Гурьева Серафима

2) Установка оптимального рH с помощью индикаторных бумажек или специальными пробами (иномерами), корректировка рH среды при «+» растворов кислот и щелочей.

3) Осветление с помощью яичного белка для сред, которые при варке мутнеют или темнеют.

4) Фильтрация жидких и расплавленных сред через ватно-марлевый фильтр

или путём отстаивания.

5) Розлив сред по пробиркам, флаконам, колбам и т.п.

6) Стерилизация зависит от состава среды и проводится в автоклавах, на водных банях или в свертывателе Коха (это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара. Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов. В аппарате Коха стерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С (желатин, молоко, углеводные среды и др.).

Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане).

7) Контроль проводится с целью подтверждения стерильности и оптимальности рH.

Алгоритм приготовления простых питательных сред:

1) Мясопептонный бульон (МПБ):

А) К мясной воде «+» 1% пептон, 0.5 частей NaCl.

Б) Кипятят на слабом огне 10-15 минут до растворения веществ.

В) Оптимизируют рH, снова кипятят 30-40 минут, до выпадения осадка.

Г) Фильтруют, доливают до первоначально объема водой.

Д) Стерилизуют 20 минут при 120°С.

2) Мясопептонный агар (МПА):

А) К МПБ до или после стерилизации»+» 2-3% измельченного агар-агара.

Б) Кипятят, помешивая на слабом огне до полного расплавления агара. Можно варить в аппарате Коха или в автоклаве.

В)

При необходимости готовую среду осветляют (яичный желток).

Г) Фильтруют, стерилизуют 20 минут при 120°С.

3) Желатиновый столбик – простая среда, в пробирке нужна для определения протеолитических свойств бактерий (расщепление белка). Разжижение желатина – протеолитическая активности.

4) Хромотогеные среды (ХС)– питательные среды, позволяющие по окраске колонии делать предварительные заключения о виде выделенного м.о.

Принцип действия ХС– реактивы в составе среды, взаимодействуют с ферментами м.о. специфичными только для этого вида с образованием окрашенных веществ.

Алгоритмы приготовления сложных питательных сред:

1) Среда с углеводами:

А) Сахарный бульон (СБ)– сложная жидкая питательная среда:

1) К МПБ нейтральной реакции «+» 0.25-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).

2)Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 30 мин.

Б) Сахарный агар (СА) – сложная плотная питательная среда:

1) КМПА «+» 0.5-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).

2) Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 15 мин.

2) Дифференциально –диагностические среды– предназначены ля определения ферментативной активности культур бактерий, это плотные питательные среды или полужидкие по консистенции, содержащие субстрат индикатор, позволяющий по изменению цвета судить о наличие у бактерий исследуемой культуры ферментов для расщепления субстрата.

А) Среда Эндо– среда для выделения энтеробактерий ( группа бактерий, которые вызывают инфекции ЖКТ и др органов):

1)100 мл МПА рH=7.4 расплавляют на водяной бане или в текучепаровом аппарате.

2) Охлаждают до 70°С и «+» 1 грамм лактозы (предварительно растворяют в воде).

3) В отдельной пробирке готовят 2-3 мл насыщенного раствора фуксина.

Конец ознакомительного фрагмента.