Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9
Шрифт:
5. Закройте пробирку пробкой.
6. Поставьте пробирки в теплое место для инкубации.
Внимание! Вынимая очищенный мицелий для пересадки, не захватите петлей первый загрязненный слой.
Посев спор.
Я обычно убеждаю потенциальных грибников начинать их грибные исследования со здоровых, чистых культур, полученных от проверенных поставщиков. Такие культуры проверены и гарантировано дадут хороший урожай при культивации. Если вы потеряете свою культуру, вы всегда сможете взять у поставщика новую чистую линию. Если вы начинаете со спор, то нет никакой
Однако есть и положительные аргументы. Культуры, полученные из спор, обычно более энергичны, чем мицелий, полученный из пересевов. Споры могут стоить мало или совсем ничего не стоить, а чистая мицелиальная культура может оказаться очень дорогой. Споры могут быть получены из высушенного гриба, в отличие от мицелия и т. д. Таким образом, получение линии из спор может быть использовано с тем же успехом, как и из чистой линии.
В предыдущей книге я писал, что споры не могут прорастать в среде содержащей перекись.
Я получил письма от нескольких грибников. Они писали мне, что им удалось прорастить споры в присутствии перекиси. Должен признать, что это действительно возможно, если концентрация вносимых спор велика. Однако не думаю, что это хорошая идея. Проросший в этих условиях мицелий может иметь генетические повреждения. И как оказывается не особенно трудно сделать проростку спор в неперекисной среде, несмотря на возможные заражения. При применении метода посева на «косяки» шанс заражения уменьшается до минимума по сравнению с чашками Петри (большое спасибо Дэвиду Сару за то, что сообщил мне об этом подходе).
Подготовка «косяков» для проращивания спор.
Чтобы подготовить скошенный агар для спор, следуйте выше приведенной методике с небольшими изменениями. При приготовлении среды не добавляйте перекись.
1. Прогрейте подготовленную среду в скороварке в течение 10 минут.
2. Залейте расплавленную среду в пробирки.
3. Закройте пробирки пробками и стерилизуйте под давлением в скороварке.
4. Разместите пробирки с горячей средой наклонно для застывания и формирования скосов.
В качестве альтернативного метода, вы можете простерилизовать пробирки и среду раздельно, разлить среду по пробиркам в стерильных условиях.
Чтобы вырастить споры одной разновидности гриба, имеет смысл засеять 5–6 «косяков», возможна потеря пары «косяков» вследствие заражения. Часть «косяков» может не прорасти.
Получение спор.
Способы сбора спор:
1. Пропарьте несколько чашек Петри в скороварке под давлением в течение 15 мин. И охладите их[63].
2. Выберете зрелое плодовое тело гриба, с которого вы хотите получить споры. Гриб должен быть чистым, без загрязнения землей.
3. Выберете чистую поверхность, в закрытом помещении без сильных воздушных потоков. Протрите поверхность губкой, смоченной в спирте.
4. Откройте одну из чашек Петри (можете положить крышку на край чашки), положите грибное тело в чашку так, чтобы гриб не касался дня чашки (для маленьких плодовых тел,
5. В зависимости от разновидности гриба, процесс сбора спор может занять некоторое время. Сбор спор можно считать законченным, когда на дне чашки появится видимый налет спор. После этого удалите гриб и закройте чашку.
Проращивание спор.
Вот один из способов проращивания спор:
1. Настройте свет и поставьте горящую спиртовку на ровной чистой поверхности. Рядом поставьте пробирки со скошенным агаром и чашку со спорами.
2. Прожгите микробиологическую петлю в верхней части пламени спиртовки.
3. Откройте одну из пробирок (придерживайте пробку мизинцем другой руки). Горлышко пробирки должно быть в пламени спиртовки. Проведите петлей по поверхности агара, для лучшей прилепляемости спор к петле. Выньте петлю из пробирки и закройте ее.
4. Откройте чашку со спорами и проведите концом петли по покрытой спорами поверхности.
5. Откройте снова пробирку, держа ее горлышком в пламени спиртовки, и проведите кончиком петли по поверхности агара.
6. Выньте петлю и закройте пробирку пробкой.
7. Поместите пробирки с культурой в теплое место. Прорастать споры могут от нескольких дней до нескольких недель, в зависимости от вида гриба.
В конечном счете, вы увидеть рост маленьких белых колоний гриба на «косяках». Будет необходимо отличать колонии грибного мицелия от колоний других загрязнителей. Некоторые контаминанты в начале развития имеют белые колонии, похожие на колонии чистой культуры, но они довольно быстро приобретают синюю или зеленую окраску при спороношении[64]. Дикие дрожжи и бактерии могут образовывать лучистые колонии слегка окрашенные или бесцветные, однородные и не имеющие гифов, как грибные. Как только вы убедитесь, что выросшие колонии действительно принадлежат нужному грибу, пересаживайте гриб на перекисную среду.
При рассматривании роста мицелия на перекисном агаре в чашках Петри, вы можете увидеть кольца (ареолы) роста мицелия. Если мицелий не однороден или загрязнен, то ореол на чашке покажет наличие секторов с различной скоростью роста. В этом случае можно взять мицелий для пересадки с края сектора, имеющего хороший радиальный вырост, и использовать его для пересадки на другую чашку Петри. Как только вы получите устойчиво растущий, без секторов, мицелий, можете использовать его для инокуляции субстрата. Не забывайте делать высевы для сохранения линии!
Идеи к ведению культуры мицелия без агара.
Агар вероятно самый дорогой компонент, используемый при культивировании мицелия. Не смотря на то что, относительно просто следовать приведенным методикам работы с агаром, множество начинающих грибников избегают работать с собственными грибными линиями из-за отсутствия опыта работы с агаром. В качестве альтернативы, я предлагаю один из способов выращивания грибных культур — на сером картоне. Серый картон дешев и доступен, а так же не содержит перекисеразрушающих ферментов. В отличие от рифленого картона, серый картон достаточно мягок и хорошо намокает. Он так же хорош как питательная среда для мицелия, способен поддерживать быстрый рост даже в тех случаях, когда отсутствуют другие питательные вещества. В случае необходимости, питательные вещества легко добавить в него.