Интернет-журнал "Домашняя лаборатория", 2007 №9

Журнал «Домашняя лаборатория»

Так, вместо того, чтобы отвешивать все необходимые вещества для приготовления агаровой среды, плавить агар, медленно охлаждать для добавления перекиси, заливать в чашки и ждать их отвердения и просушки, вы можете просто обрезать картон по размерам чашки и пропитать его водой или необходимым питательным раствором. После заливки картонных дисков, стерилизуйте их в скороварке 10 мин.

Если вам трудно достать серый картон, то его можно заменить газетной бумагой. Но эта замена имеет некоторые недостатки по сравнению с серым картоном. С одной стороны трудно контролировать рост мицелия из-за неравномерности окраски газетной бумаги. Когда мицелий растет

на бумаге, он может быть тонким как паутинка, и располагаться преимущественно на нижней, скрытой стороне. Кроме того, рост мицелия редко проявляется в виде четких круговых ареолов, таких как вырастают на агаре. Так же наблюдается неравномерный рост мицелия между слоями бумаги.

Я еще не выяснил, может ли мицелий неоднократно расти на смоченном картоне без дополнительных питательных веществ. Ожидаемо, что рост на картонных дисках замедлится без внесения дополнительных источников азота. Для длительных пересадок на картонных дисках я рекомендую добавлять в раствор источник азота.

Как подготовить пластины.

Вот детальное описание методики подготовки картонных дисков. Заметьте, что вместо чашек Петри, вы можете использовать любую подходящую посуду.

1. Отмерьте примерно 100 мл. воды из под крана в маленькую банку.

2. Для приготовления питательной среды, возьмите другую маленькую банку, налейте в нее 100 мл. воды из под крана и добавьте туда чайную ложку патоки (меда) или солодового порошка.

3. Найдите небольшой лист серого картона, чем толще, тем лучше. Предпочтительно с двусторонней серой окраской. Вырежьте из него несколько дисков в размер чашек Петри.

4. Взвесьте один картонный диск и запишите его вес. Умножьте этот вес примерно на 1,3 (с разным картоном возможны разные варианты) и добавьте высчитанный вес воды или питательного раствора к каждому диску в чашку Петри.

5. Закройте чашки крышками и дайте им пропитаться.

6. Стерилизуйте чашки в скороварке под давлением 10 мин. (прежде чем закрыть клапан, продуйте скороварку паром 10 мин.).

7. Охладите скороварку и выньте чашки.

8. Когда вода охладилась, добавьте в банку со стерилизованной водой в расчете на каждую чашку 3,3 мл. 3 % раствора перекиси водорода используя пастеризованную кипятком пипетку. Концентрация перекиси должна составлять примерно 0,1 %.

9. Добавьте в каждую чашку 0,1 % раствора перекиси примерно треть от веса картона, после этого чашки готовы к использованию.

Вы можете хранить чашки с дисками в пищевых пластиковых емкостях. Вероятно вы столкнетесь с проблемой быстрого высыхания картонных дисков. Для решения этой проблемы добавьте небольшое количество перекиси в контейнер с чашками. Поставьте чашки на небольшую платформу, для того что бы перекись не заливала чашки.

Пересев.

Вероятно, вы задаетесь вопросом, каким же образом совершить пересев с картонного диска?

Метод пересева прост — стерильным скальпелем поскребите поверхность влажного картонного диска с мицелием, это позволит соскоблить колонию гриба с частичками картона и перенести на другую чашку.

Рифленый картон слишком жесток для легкого удаления мицелия с поверхности.

Очистка мицелия.

Я уже объяснял в первом томе, что скрытые контаминанты могут расти на поверхности мицелия, росшего на перекисной среде, поскольку перекись на поверхности мицелия отсутствует. Периодически

грибные культуры должны очищаться от скрытых инфекций, иначе они могут присутствовать в грибных плодах, и попасть в споровый материал.

Мицелий, выращенный на картонных дисках, не является исключением.

С агаровыми культурами мы чистили мицелий с помощью довольно неуклюжей процедуры — изъятия агарового диска из основания чашки Петри в крышку, и прививки мицелия на нижнюю сторону агара. После приростания мицелия агаровый диск возвращался на место. Это вынуждало агар прорастать через среду оставляю загрязнители позади. Хотя этот способ неплохо работает, применение его дает большое количество брака из-за большого количества механических операций.

С картоном легко делать прививку в основание диска: вам нужно только перевернуть чашку вверх дном и потрясти ее, чтобы диск отвалился от дна чашки и прилип к крышке. Перенесите образец мицелия на внутреннюю поверхность диска стерильным скальпелем, закройте чашку и, перевернув чашку, щелкните по ней. Диск отклеится от крышки и вернется на место. Но как оказывается, мицелий прорастает сквозь диск очень медленно, предпочитая расти по сторонам. Вместо того, что бы ждать пророста мицелия в центре, мы позволяем мицелию свободно расти под слоем картона. Влияние загрязнений, попадающих с боковой стороны, несущественно. Эта процедура обеспечивает чистоту мицелия, если вы берете материал для пересева с края колонии.

Если у вас не получается остановить распространение инфекции высевом мицелия в центр диска, можете попробовать сделать из двух смоченных дисков «сандвич» и сеять между ними. Несъедобность картона должна затормозить распространение инфекций. Когда вы захотите извлечь мицелий из «сэндвича», нужно вырвать кусочек картона с мицелием из периферии. Поскольку вы не можете наблюдать, как далеко пророс мицелий, вам нужно внимательно следить за временем инкубации. Нужно дать мицелию достаточно времени для прорастания.

Хранение культур без агара.

Недавно засеянные картонные диски могут быть извлечены стерильным пинцетом и сохранены в стерильном ziplock^[65]– e. После перенесения, дайте мицелию вырасти в течение недели или двух. В качестве альтернативы — узкие стерилизованные увлажненные полоски картона можно привить маленьким кусочком агаровой культуры, затем, с помощью стерильного пинцета, поместить в пробирку для хранения. Когда придет время восстанавливать культуру из хранения, данная полоска может быть помещена в чашку Петри со средой для культивации. Еще один способ состоит в увлажнении и стерилизации небольших бумажных гранул в пробирке в течение 10 минут, и прививки небольшим количеством агаровой культуры. После того как мицелий вырастет, культура может быть сохранена в течение длительного периода.

Я еще не проверял, как долго такие культуры способны сохранятся, но подозреваю, что дольше, чем агаровые, так как влажная бумага и картон, больше походят на природные условия существования грибов. Если вы не будете добавлять никакого дополнительного питания, то среда будет скудной, что обычно и рекомендуется для длительного хранения.

Пересылка культур по почте.

Культуры, посеянные на бумаге или картоне, могут быть легко отосланы по почте. Сделайте бутерброд мицелия между двух картонных дисков, поместите его в ziplock и прорастите несколько дней. Поместите его в пакет или книгу.