Полный справочник медицинской аппаратуры
Шрифт:
Для аспирации фолликула применяется пониженное давление. Точка пункции фолликула должна располагаться в неваскуляризо-ванной области или примыкать к стромальным элементам яичника для того, чтобы предотвратить утечку фолликулярной жидкости из переполненного фолликула. Собранная фолликулярная жидкость может быть сразу исследована на содержание в ней яйцеклетки.
Забор яйцеклеток до момента овуляции необходим, так как после овуляции яйцеклетка попадает в маточную трубу или брюшную полость, где становится практически недоступной.
Предовуляторная яйцеклетка человека может быть обнаружена невооруженным глазом по наличию в аспирате массивных
Оплодотворение и перенос эмбрионов
Для оплодотворения яйцеклеток в день пункции необходимо наличие свежей спермы супруга. Сперму получают путем мастурбации. В редких случаях супруг сдает сперму заранее и она хранится в лаборатории при очень низкой температуре (криоконсервация спермы). Сперму с учетом ее разжижения при комнатной температуре разводят в 2 смывах оплодотворяющей среды. Удаление семенной плазмы производят следующим образом. Небольшое количество спермы разводят в 4-кратном объеме оплодотворяющей среды, затем суспензию сперматозоидов центрифугируют, удаляют надсадочную жидкость, ресуспензируют комочек сперматозоидов и повторяют эту процедуру. Полученный таким образом комочек сперматозоидов вновь ресуспензируют, определяют их концентрацию и подвижность и доводят эти параметры до значений, которые считаются стандартными для процедуры оплодотворения яйцеклетки.
Затем сперматозоиды переносят в специальный термостат, где уже находятся яйцеклетки. При осеменении на 1 яйцеклетку добавляют 200 000–300 000 сперматозоидов.
Процесс культивирования происходит в специальной среде с абсолютной влажностью, при температуре 37 °C в растворе с рН, равным приблизительно 7,6, в атмосфере, содержащей 5 % СО2, 5 % О2 и 90 % Яйцеклетку оставляют в суспензии сперматозоидов на 6-18 ч.
Следующие морфологические особенности яйцеклетки, большинство которых выявляют с помощью микроскопа, могут определить признаки произошедшего оплодотворения:
1) выталкивание второго полярного тельца в желточное пространство;
2) цитоплазма яйцеклетки сжимается, отступая от оболочки;
3) в ранней стадии оплодотворения в цитоплазме яйцеклетки может наблюдаться головка, срединный сегмент и хвост сперматозоида. Эти признаки могут отмечаться только при сильном увеличении, используя фазово-контрастную методику;
4) в более поздние стадии (около 12–18 ч после инсеменации) в цитоплазме могут быть мужские и женские проядра.
Деление зиготы
После завершения периода инсеменации яйцеклетку переносят в равновесную каплю среды по парафиновое масло. Среда состоит из свежеприготовленного раствора Ham F10 с добавлением 15 % сыворотки крови больной. Растущий эмбрион человека культивируется при температуре 37 °C в атмосфере, содержащей 5 % СО 2, 5 % О 2и 90 % N 2в среде с рН, равным 7,3.
О нормальном развитии эмбриона в культуре свидетельствует появление
Если клетки развивающегося эмбриона имеют неправильную форму или отходят от блестящей оболочки, или же скорость деления клеток существенно отличается от описанной выше, то развитие эмбриона считается патологическим и он непригоден для переноса в полость матки.
Оставшиеся эмбрионы хорошего качества могут быть сохранены при очень низкой температуре для дальнейших попыток (криоконсервация эмбрионов).
Так как в большинстве случаев эмбрион переносится в полость матки на стадии 8 или 16 клеток, то это означает, что эмбрион человека перед имплантацией должен содержаться в культуре в течение 3–4 суток.
Эмбрион в 0,05 мл культуральной среды осторожно засасывается в стерильный катетер диаметром 1,4 мм. Затем катетер проводится через цервикальный канал в полость матки, где в области дна эмбрион высвобождается из катетера. С целью облегчения проведения этой процедуры катетер следует разместить по длине для контроля положения его конца в полости матки. Помимо этого, следует очень аккуратно манипулировать шейкой матки во избежание сокращения мышц матки. Если в полость матки переносят более двух эмбрионов, существенно повышается риск многоплодной беременности. После переноса эмбрионов в полость матки назначают препараты прогестерона и эстрогены, чтобы поддержать имплантацию эмбриона. В этом случае говорят о поддержке лютеино-вой фазы.
Контроль подтверждения беременности
Для контроля ранних сроков развивающейся беременности проводят динамическое определение – субъединицы хориониче-ского гонадотропина, которое помогает определить беременность с 7-9-го дня после ТЭ. При наступлении беременности за женщинами ведется постоянное наблюдение методами, принятыми для ведения беременности и родов женщин с отягощенным акушерским анамнезом.
Должно производиться серийное ультразвуковое обследование плода. На 1-7-й неделе беременности определяются положение амниона и сердечная деятельность плода. После этого контроль должен производиться на 20, 28 неделе и далее с целью определения степени развития плода. На основании полученной информации можно наблюдать характеристики роста плода на протяжении беременности и выявить определенную патологию развития скелета. Пункцию амниона можно производить приблизительно на 16-й неделе беременности. Таким образом может быть определен кариотип и уровень фетопротеинов, определяющий наличие дефектов развития нервной трубки плода.
ИКСИ (инъекция сперматозоида в яйцеклетку) – это особая форма ЭКО, применяемая при тяжелых формах мужского бесплодия. При низком содержании подвижных сперматозоидов в эякуляте – тяжелой олигозооспермии и/или астенозооспермии, и/или тератозооспермии вероятность оплодотворения очень мала. Поэтому основной задачей ИКСИ является осуществление проникновения сперматозоида через оболочку яйцеклетки – оплодотворение. Для успешного проведения ИКСИ достаточно наличия в эякуляте единичных живых сперматозоидов.