Респираторная медицина. Руководство (в 2-х томах)

Чучалин А. Г.

ДИАГНОСТИКА МИКОБАКТЕРИЙ

После разжижения мокроты и центрифугирования из осадка производят высевы на яичную среду (Левенштейна - Йенсена) или агаровую основу (среда Миддлбрука 7Н10). Селективные среды содержат ингредиенты, тормозящие рост сопутствующих бактерий и грибов. Инкубацию проводят во влажной атмосфере с содержанием 8 - 12% диоксида углерода. Образцы можно инокулировать в жидкую среду с ¹⁴С-пальмитиновой кислотой с добавлением или без антимикробных агентов, используя радиометрический метод и аппарат BACTEC 480TB. Чувствительность этого метода достигает 10 КОЕ/мл. Для получения роста МБТ на первичных средах требуется 3 - 5

нед инкубации, затем еще 1 - 2 нед для подтверждающего ниацинового теста и определения чувствительности к антитуберкулезным препаратам. В среднем, исследование с применением радиометрического метода занимает

18 дней, обычным методом - 36 дней [39].

ДИАГНОСТИКА АЭРОБНЫХ АКТИНОМИЦЕТОВ

Аэробные патогенные актиномицеты включают роды Nocardia , Streptomyces , Actinomadura и Rhodococcus , Micromonospora , Micropolyspora , Thermoactinomyces и Saccharomonospora. Они вызывают пневмониты (альвеолиты) и хорошо растут

(в течение 3 - 7 дней) на простых бактериальных и грибковых средах при 50 ⁰;С во влажной атмосфере. Однако у рода Nocardia для роста колоний может потребоваться 3 нед инкубации. Идентификацию актиномицет проводят по морфологическим признакам колоний, микроскопическому строению микроорганизмов, способности гидролизовать различные субстраты, взаимодействию чистых культур с антительными диагностикумами в серологических реакциях.

ДИАГНОСТИКА ГРИБОВ

Лабораторную диагностику пневмомикозов проводят культуральным, гистологическим и серологическими методами. Для посева используют картофельные среды, сабуродекстрозный агар, агар на сердечно-мозговой вытяжке, также селективные среды, содержащие хлорамфеникол и гентамицин, иногда с добавлением циклогексимида, подавляющего рост быстрорастущей плесени и ингибирующего C. neoformans, Aspergillus fumigatus и некоторые виды Candida. В отличие от бактерий, которые культивируют при 35 ⁰;С, посевы грибов инкубируют при 30 ⁰;С.

Грибы рода Candida часто обнаруживают в БАС, но они редко бывают истинными возбудителями ИНДП. При исследовании аутопсийной ткани легких гистологическое подтверждение кандидоза было выявлено лишь у 2% онкологических больных и у 0,5% пациентов без неопластических процессов [40]. Определение кандидозного антигена непосредственно в сыворотке крови или клинических образцах мало помогает в диагностике локального или диссеминированного кандидоза, поскольку чувствительный метод ИФА выявляет присутствие антигенов и антител у здоровых и у 50 - 75% больных при диссеминированном кандидозе [41].

Инвазивный легочный аспергиллез (ИЛА) встречается чаще, чем легочный кандидоз, в 90% наблюдений выделение аспергилл из мокроты и БС связано с колонизацией НДП [42]. В то же время, при подтвержденном ИЛА лишь у 10% больных из мокроты были выделены Aspergillus spp. Для правильной интерпретации результатов культуральной диагностики необходимо производить посевы двух образцов, полученных при транстрахеальной легочной биопсии и методом ЗЩ [43]. Для ранней диагностики ИЛА может быть полезным обнаружение аспергиллезного антигена в сыворотке крови методом ИФА, чувствительность которого варьирует в пределах 60 - 100% в разных группах больных [33].

Выделение C . neoformans из респираторного тракта следует трактовать с осторожностью, так как в половине наблюдений у пациентов отсутствуют признаки поражения паренхимы легких, рентгенологические изменения и другие симптомы заболевания, это свидетельствует лишь о колонизации грибами [44]. Для подтверждения диагноза

криптококкоза помогает обнаружение криптококкового антигена в сыворотке крови и ликворе. Антиген можно определять также в плевральном выпоте и БАС [32].

Неопределенность в оценке положительных и отрицательных результатов посевов при диагностике оппортунистических грибковых инфекций возрастает у больных с иммунодефицитами. Существует два наиболее достоверных критерия прижизненной диагностики таких инфекций:

– --обнаружение грибов в ткани легких при культуральном или гистологическом исследовании;

– --выделение культуры при посеве ликвора или других стерильных жидкостей тела, исключая кровь и мочу, которые могут контаминироваться, в том числе при заборе материала [45].

В отличие от оппортунистических возбудителей пневмомикозов, выделение патогенных диморфных грибов Blastomyces dermatitidis , Coccidioides immitis , Histoplasma capsulatum , Paracoccidioides brasiliensis и Sporothrix schenckii из респираторных образцов, ткани легких и биоматериалов других локализаций имеет несомненную клиническую значимость. Эти грибы существуют в мицелярной и дрожжевой (или в виде сферул) формах. В среднем, их рост на средах появляется через 14 дней (грибов рода Candida - через 1 - 3 дня, Aspergillus spp.
– через 4 -

7 дней). В рутинной практике посевы инкубируют до 4 нед у пациентов при серологически подтвержденной грибковой инфекции или у больных, получавших антигрибковую терапию при неустановленной этиологии инфекционного процесса. Присутствие орофарингеальной микрофлоры в респираторных образцах не препятствует интерпретации результатов посевов на диморфные грибы. Посевы осуществляют при отрицательных результатах прямой микроскопии окрашенных препаратов, в том числе специальными методами, где можно легко идентифицировать соответствующий возбудитель по характерной морфологии. При диссеминированной грибковой инфекции исследуют материалы из других анатомических областей. Например, при генерализованном гистоплазмозе прямая микроскопия окрашенных мазков костного мозга помогает быстро поставить диагноз у 50% больных, положительный посев обнаруживается в 84% наблюдений [46]. Дополнительный диагностический тест - обнаружение полисахаридного антигена H . capsulatum в моче методом ИФА у 90% больных, однако этот тест может быть положительным и у пациентов с диссеминированной инфекцией, вызванной P . brasiliensis , В. dermatidis , Penicillium marneffei [47].

ДИАГНОСТИКА ХЛАМИДИЙ

У детей хламидийную пневмонию, вызванную C hlamydia trachomatis, можно диагностировать методом РИФ, культуральным и серологическими методами. Для посева обычно используют гетероплоидные мышиные клетки МакКой, обработанные циклогексимидом, которые инкубируют 40 - 72 ч, после чего исследуют наличие внутриплазматических включений хламидий при световой микроскопии после окрашивания иодином гликогена, продуцируемого хламидиями в инфицированных клетках. Более быстрый и чувствительный метод - РИФ при окраске культуры клеток моноклональными антителами.

C. psittaci не продуцирует гликоген и ее внутриплазматические включения выявляют при окраске по Гимзе обычно после 5 - 10 дней инкубации. Поскольку клеточные культуры C. psittaci высоко инфекционные, метод культивирования используется редко, и диагноз пситтакоза устанавливают серологическими методами.

C. pneumoniae можно обнаружить при заражении респираторными образцами монослоя культуры клеток HeLa-229. После инкубации в течение 3 - 5 дней готовят окрашенные специфическими моноклональными антителами препараты и изучают методом РИФ.